Клинико-диагностическая ветеринарная лаборатория г. Воронеж,  ул. Кропоткина 10-а БЦ (вход ЗВЦ «Лимпопо») График работы: с 10:00 до 18:00 ежедневно

Отбор материала для патоморфологического исследования. Путь к успешному лечению животного с опухолевым процессом начинается с диагностики патологического очага на макроскопическом уровне. Следующий шаг – это дифференциальная диагностика патологического процесса при помощи микроскопии (воспаления, гиперплазии, неоплазии или же сочетания этих процессов).

ВНИМАНИЕ: Отбор материала для патоморфологического исследования должен проводиться только ветеринарным специалистом с учетом локализации, клинико-морфологических особенностей образования и анатомического строения области интереса взятия пункции.

Морфологический метод анализа клеточного состава патологических процессов. Является быстрым, недорогим и малоинвазивным методом по сравнению с гистологией.

Имеет преимущество перед гистологическим при оценке процессов в случае инфицирования бактериальными и грибковыми агентами.

Позволяет более детально рассмотреть отдельные структуры клеток.

Отсутствие данных об архитектонике исследуемой ткани (то есть невозможности оценки инвазии, что важно для определения злокачественности и прогноза заболевания)

Малое количество материала, на основании которого не всегда можно четко сформулировать заключение. Отсутствие возможности дифференцировать пролиферативные, дистрофические, предопухолевые процессы и доброкачественные опухоли.

Зависимость качества материала от техники забора и места отбора пункции (при небольших очагах может быть не информативным)

Тонкоигольная биопсия

Является удобной техникой исследования образования мягких тканей (кожные поражения, лимфоузлы, образования брюшной и грудной полости) и выпотов из полостей тела.

Важно: для взятия биопсии иглу вводят именно через опухолевую зону, избегая прокола «здоровых» тканей для предотвращения диссеминации опухолевого процесса. В дальнейшем, при операционном лечении, место пункции удаляется вместе с тканью опухоли.

Оборудование для проведения исследования:

  • Сухие стерильные предметные стекла
  • Шприцы на 5 (2/10/20 мл). Шприцы на 10/20 мл удобнее использовать для аспирации из плотных образований.
  • Иглы 20 -27 G
  • Карандаш (для стекол с матовым концом) или спиртоустойчивый маркер.
  • Пробирки для отбора жидкостей без наполнителя и с антикоагулянтом.
    ВАЖНО: проба, отобранная в пробирку с ЭДТА не пригодна для микробиологического исследования вследствие бактериостатического действия антикоагулянта.
  • Емкости для хранения, транспортировки цитологических образцов.
    В идеале делается несколько мазков из одного или двух мест новообразования в зависимости от размера.
    Для таких органов, как печень и селезенка, необходимо использовать более длинные иглы, особенно для крупных пород собак.
    Спинальные иглы со стилетом рекомендованы для того, чтобы избежать контаминации клетками прилегающих тканей.
    Материал может быть получен «аспирационными» и не аспирационными методами.
    Не аспирационная техника предпочтительна для взятия всех обильно васкуляризированных образований или органов (печень/селезенка), для того чтобы минимизировать контаминацию периферической кровью.

Не аспирационная техника отбора материала (ТИБ)

Подходит для отбора проб при кожных поражениях. Данный метод позволяет лучше сохранить морфологию хрупких клеток и сводит к минимуму контаминацию образца.

Может давать недостаточное количество клеток в материале из слабо эксфолиативных масс.

1 вариант: Использование только иглы

  1. Игла без шприца вводится в поражение после обработки кожи.
  2. Затем иглу вводят поступательными движениями вперед -назад в ткани около 10 раз и извлекают.
  3. Прикрепляют шприц, заполненный 3-5 мл воздуха и быстро и осторожно выдавливают клетки на предметное стекло.

2 вариант: использование иглы с прикрепленным шприцем:

  1. Предварительно заполненным 3-5 мл воздуха. Игла со шприцем вводится в ткани поступательными движениями вперед – назад (в пределах одного прокола).
  2. После извлечения из тканей материал наносится на стекла и сразу же готовится мазок .

Аспирационная техника (ТИАБ)

Подходит для отбора проб при большинстве поражений кожи (невозможность взятия соскоба (например, мезенхимальные пролиферации).

Чрезмерное отрицательное давление, возникающее при применении данного метода, может привести к повреждению клеток, преимущественно, таких хрупких, как лимфатические. Так же возможна чрезмерная гемодилюция образца.

  1. Перед проведением процедуры, кожа на месте взятия материала дезинфицируется как перед проведением венепункции.
  2. Образование/орган фиксируются в одной руке, а другой вводится игла, прикрепленная к шприцу.
  3. Далее поршень шприца оттягивают, создавая отрицательное давление, одновременно двигая иглу в разных направлениях внутри области интереса.
  4. Иглу с прикрепленным шприцем извлекают после отпускания поршня.
  5. Шприц наполняют 3-5 мл воздуха и снова прикрепляют к игле, и осторожно выдавливают содержимое на предметное стекло.

Примечания:

  • возможно использование коммерческих аспирационных пистолетов при аспирации из н/о или органов, которые сложно иммобилизировать. При их использовании нет необходимости тянуть за поршень шприца, вакуум можно легко сделать одной рукой.
  • рекомендовано проводить ТИАБ органов и образований брюшной полости под контролем УЗИ.

Техники изготовления цитологических препаратов

При изготовлении мазков следует избегать избыточного сдавливания. Для приготовления цитологических мазков можно использовать метод «мазка крови» и методом «сквош» (компрессионной капли).

Метод мазка крови: подходит для любых жидких образцов.

  1. Каплю образца помещают на предметное стекло, близко к окошку для маркировки.
  2. Конец второго стекла (шпателя) помещают перед каплей под углом в 30 градусов в среднем и сдвигают аккуратно, пока оно не коснется нанесенной капли образца.
  3. После контакта с образцом каплю медленно растягивают по всему предметному стеклу. Мазок растягивают, создавая препарат с толстым и тонким краем (с зоной монослоя и «щеточкой»). Следует учитывать, что чем более жидкой образец, тем угол более тупой; если же образец вязкий, то угол нужно делать острее.

Метод «сквош»: подходит для большинства цитологических образцов.

  1. Материал, полученный путем тонкоигольной биопсии, наносится на сухое чистое предметное стекло.
  2. Второе предметное стекло помещают сверху первого (перпендикулярно), слегка соединяя стекла для равномерного распределения материала, стекла медленно раздвигают в разные стороны в результате чего клетки равномерно распределяются на оба стекла.

При изготовлении препаратов таким способом следуем соблюдать осторожность, не оказывая чрезмерного давления, которое может привести к повреждению клеток. Образцы материала не должны выходить за край мазка.

Мазки – отпечатки

Подходит для взятия клеток непосредственно с поверхности области интереса (со среза удаленного образования, с области влажных язвенных, тонких экссудативных поражений). Применяется если невозможно выполнить тонкоигольную аспирацию.

Полученный образец является информативным только для верхней части поражения, клетки в препарате могут не демонстрировать патологии в более глубоких слоев. Так же вероятна бактериальная контаминация.

Аккуратно промокнуть интересующую часть поражения стерильной марлей, удаляя кровь и тканевые жидкости. Наложить предметное стекло на поражение .

Забор материала и приготовление мазков при помощи тампона.

Подходит для оценки полостей, синусовых путей и поражений с дренажом (примеры: ушная раковина, вагинальная цитология).

Ватный тампон, пропитанный физиологическим раствором, вводят в раневой канал или очаг поражения с дренажом. После извлечения аккуратно прокатывают по предметному стеклу, делая несколько продольных мазков.

Цитологические мазки сушат только на воздухе.
Они не должны подвергаться действию паров формалина и повышенной влажности.
Если мазки отправляются в диагностическую лабораторию, то самостоятельное окрашивание не рекомендуется.
Нельзя склеивать мазки, сушить мазки при помощи зажигалки или фена, фиксировать мазки в спирте до полного высыхания.

Факторы, способные оказать влияние на информативность цитологических образцов:

  • Некорректная техника отбора проб или неверное распределение образца по предметному стеклу;
  • Чрезмерная аспирация
  • Повреждение клеток при их распределении по предметному стеклу.
  • Геморрагические поражения
  • Аспирация из очага некроза
  • Эксфолиативный материал (а также, поражения богатые коллагеном стромы).
  • Сложности связанные со спецификой окрашивания
  • Недостаточное окрашивание, связанное с неправильным протоколом окраски или контаминация материала с предыдущим окрашиванием.
  • Загрязнение образца смазкой или ультразвуковым гелем.
  • Воздействие паров формалина на нефиксированные предметные стекла.

Когда в образце мало клеток или образец содержит преимущественно разрушенные клетки, не имеющих четких границ цитоплазмы, цитологическая интерпретация невозможна и рекомендован повторный отбор проб.

Аналогично если клеток в мазке много, и они расположены плотными слоями, не позволяющими визуализировать морфологические особенности клеточной популяции, сделать корректное цитологическое заключение не представляется возможным.

Так же если в образце достаточно клеток, они не подвергались внешнему воздействию, но качество окрашивания низкое и не представляется возможности его улучшить, цитологический диагноз должен быть исключен.

Список использованной литературы:

  1. Атлас опухолей собак и кошек. Интерпретация и диагностика. Киль А., Кальдервуд Мейс М. М.- издательство «Аквариум» 2018, 220с.
  2. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпретация и диагностика. Денни Мейер, Джон Харви. Перевод с англ.-М.: «Софион» 2007, 456с.
  3. Ветеринарная клиническая патология. Введение в курс. Под общей редакцией М.Джексона/.-М.: «Аквариум»
  4. Цитологические исследования у собак и кошек. Справочное руководство/ под общей редакцией Дж.Данна /Пер. с англ. Е.Поляковой.- М.: «Аквариум Принт», 2016, 256с.
  5. Цитология. Дифференциальная диагностика новообразований кожи и мягких тканей у мелких домашних животных. Франческо Чиан, Паола Монти /Пер. и научная редакция М.А.Оксюкевич, А.А. Добычина, Т.В. Андреева, Р.А.Суханов, А.А.Газин, А.С.Чобода — Издательский дом «НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА», 2021, 230с.

Мы ответим на ваши вопросы!

Наши специалисты готовы проконсультировать вас по услугам нашей ветеринарной лаборатории.

+7 (995) 220-07-27+7 (993) 298-03-77